Школа хроматографіста: Загальна стратегія розробки аналітичної методики, основні закономірності вибору хроматографічних умов методом високоефективної рідинної хроматографії

ПРОГРАМА СЕМІНАРУ

Програма семінару.pdf

ДЕНЬ 1 — ОСНОВИ ТА ЛОГІКА ХРОМАТОГРАФІЧНОГО РОЗДІЛУ

Вебінар 1. Основи RP-HPLC та параметри розділення

• базові принципи адсорбційної зворотно-фазної ВЕРХ
• механізми утримання та типи взаємодій
• ключові фактори розділення піків
• взаємозв’язок: розподільна здатність, селективність, ефективність, коефіцієнт ємності
• «основна формула хроматографії»

Колонки та нерухома фаза:

• сучасні фази (золь-гель технологія)
• поняття «аналогічні колонки»
• вплив параметрів колонки на розділення:

•   довжина
•   внутрішній діаметр
•   підхід до вибору колонки
   

Вебінар 2. Вибір рухомої фази та логіка розробки методики

Склад рухомої фази:

• вплив органічного компоненту на розділення
• метанол vs ацетонітрил
• модифікатори та їх роль
• тетрагідрофуран у ВЕРХ
• іон-парні реагенти

Логіка розробки методики:

• використання літературних даних
• вплив pKa на вибір умов
• роль pH рухомої фази
• гідрофобність сполуки
• кондиціювання системи
• використання ТШХ як інструменту

Додатково:

• вплив розміру пор частинок нерухомої фази

Вебінар 3. Розділення кислотних та основних сполук

• особливості розділення основних сполук
• коли використовувати полярні фази C18
• роль неендкепіруваних фаз

Розділення кислотних сполук:

• підходи для RP C18

Буферні системи:

• застосування буферів
• буферовані vs небуферовані елюєнти
• вибір буферів для іонних сполук
• полярні обернено-фазні сорбенти

 ДЕНЬ 2 — ОПТИМІЗАЦІЯ ТА ПРАКТИКА

Вебінар 4. Контроль параметрів та підготовка системи

• роль pH у розділенні полярних та іонних аналітів
• system suitability tests (система придатності)
• вибір режиму елюювання:

• ізократика
• градієнт
• вплив фактору ємності (k’) та його оптимізація

Робота з пробою:

• вибір об’єму та концентрації
• пробопідготовка
• фільтрування рухомої фази
• вибір мембранних фільтрів
   

Вебінар 5. Оптимізація HPLC методик

• вплив температури на розділення
• способи скорочення часу аналізу
• оптимізація швидкості потоку
• підвищення чутливості
   

Глибока оптимізація:

• алгоритми оптимізації розділення
• вплив ефективності на розділення
• оптимізація ефективності
• прискорення аналізу без втрати якості
   

Стратегія:

• схеми розробки аналітичної методики

Вебінар 6. Практична частина

• ~150 прикладів розробки аналітичних методик
• вибір умов на основі структури молекули
• вплив pKa на поведінку аналіту
• обґрунтування складу рухомої фази
• вибір типу нерухомої фази

з поясненням логіки прийняття рішень